本发明涉及一种胍有效成分含量的检测方法，具体地说，涉及一种聚六亚甲基胍含量的检测方法。其采用带负电荷、粒径13-35nm的纳米金溶液作为指示剂，采用分光光度计或比色卡作为检测设备，采用HEPES（羟乙基哌嗪乙磺酸）溶液作为缓冲液来检测聚六亚甲基胍含量。1、本发明灵敏度高，抗干扰性强；本发明还可以采用比色卡现场可视化检测待测样品中的聚六亚甲基胍浓度，而国标法无法检出。
1.一种聚六亚甲基胍杀菌消毒剂中聚六亚甲基胍含量的检测方法，其特征在于，其采用带负电荷、粒径13-35nm的纳米金溶液作为指示剂，采用分光光度计或比色卡作为检测设备,采用HEPES溶液作为缓冲液，来检测聚六亚甲基胍含量。
2.根据权利要求1所述的聚六亚甲基胍含量的检测方法，其特征在于，具体步骤如下：1)准备标准溶液及试剂：氯金酸、柠檬酸钠、羟乙基哌嗪乙磺酸、蒸馏水、聚六亚甲基胍标准溶液；2)配制显色液和稀释液：a、合成带负电荷的纳米金溶液，其最大吸收波长520±5nm，粒径13-35nm；b、配制pH值在6-8之间，1mol/L的HEPES(羟乙基哌嗪乙磺酸)溶液作为缓冲液；c、配制显色液：将步骤a和b制得的纳米金溶液和HEPES缓冲液混合，HEPES溶液最终浓度小于100mmol/L；d、配制稀释液：将步骤b制得的HEPES缓冲液，与蒸馏水混合，HEPES溶液最终浓度小于100mmol/L；3)采用分光光度计作为检测设备，通过绘制标准曲线检测待测样品中聚六亚甲基胍浓度。
3.根据权利要求2所述的聚六亚甲基胍含量的检测方法，其特征在于，所述步骤3)的具体步骤如下：(1)配制不同浓度聚六甲基胍标准溶液，至少三个浓度；(2)取聚六甲基胍标准溶液，加入等体积的显色液，反应5分钟；(3)绘制标准曲线：用分光光度计测量上述步骤3-(2)中标准溶液的在波长600到700纳米之间的吸光值，每一浓度标准溶液的至少检测三次，取平均值，以聚六亚甲基胍标准溶液浓度为横坐标，以每一浓度标准溶液的吸收率为纵坐标，绘制标准曲线；(4)取待测样品，加入等体积的显色液，反应5分钟，用分光光度计测定待测样品在波长600到700纳米之间的吸光值，在步骤3-(3)绘制的标准曲线上查得相应的浓度值。
4.根据权利要求2所述的聚六亚甲基胍含量的检测方法，其特征在于，所述步骤3)还可以是：采用比色卡检测待测样品中的聚六亚甲基胍浓度，具体步骤如下：(1)制作标准比色卡；(2)取待测样品，加入等体积的显色液，呈色；(3)与标准比色卡自上而下目视比色，与标准比色卡色调相近的颜色所对应的浓度即是待测样品中聚六亚甲基胍的含量。
5.根据权利要求4所述的聚六亚甲基胍含量的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中比色卡的制作方法为：配制0.05ppm到0.5ppm的聚六甲基胍标准溶液，至少三个浓度，取一份标准溶液，加入等体积的样品与显色液，混匀，5分钟后用数码相机拍照，经图像处理后，彩色打印。
6.根据权利要求2所述的聚六亚甲基胍含量的检测方法，其特征在于，所述步骤2)-a中纳米金溶液的配制方法为：在93ml水中加入2ml，1％的氯金酸溶液加热沸腾后，再加入5ml，1％的柠檬酸钠溶液，继续加热20分钟，冷却至室温备用。
7.根据权利要求2所述的聚六亚甲基胍含量的检测方法，其特征在于，所述步骤2)-b中HEPES缓冲液的配制方法为：称取260.39克HEPES加入蒸馏水溶解，调节pH值6到8，定容至1L即可。技术领域
本发明涉及一种胍有效成分含量的检测方法，具体地说，涉及一种聚六亚甲基胍含量的检测方法。
背景技术
聚六亚甲基胍是一种高分子阳离子聚合物，常见的有聚六亚甲基单胍盐酸盐(PHMG-HCl)和聚六亚甲基双胍盐酸盐(PHMB-HCl),都易溶于水。其水溶液无色无气味，具有极强的杀灭细菌能力和长期抑菌作用，常用作外用医疗器械和皮肤、伤口的消毒灭菌、病房的空气、墙壁、地面、厕所以及垃圾箱等公共卫生用品消毒。作为环保型高分子聚合物杀菌消毒剂，聚六亚甲基胍具有杀菌广谱、有效浓度低、作用速度快、性质稳定、易溶于水，可在常温下使用，长期抑菌、无副作用，无腐蚀性，无色、无嗅、无毒，不燃、不爆、使用安全，运输方便等优点。其可广泛应用于食品加工行业、饮用水和游泳池消毒、日用品消毒、建筑材料业、纺织业、造纸业、木材加工业、橡胶工业、石油开采、农林水产牧副渔等行业。传统的聚六亚甲基胍的检测方法主要有以下几种：1、反相液相色谱法：该方法步骤繁琐、所需设备昂贵、检测结果准确度不高。2、国家标准检测方法—聚六亚甲基双胍含量的测定方法(GB26367-2010)：该法采用分光光度计检测，不需要昂贵设备，较为方便，但该法显色不明显，很难肉眼分辨，无法现场可视化检测待测样品。3、胶体滴定法：该方法操作繁琐，易受干扰，灵敏度也不高。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提出了一种步骤简单、灵敏度高、干扰小且无需昂贵检测设备，可现场目视检测聚六亚甲基胍含量的方法。本发明的技术方案是：一种聚六亚甲基胍含量的检测方法，采用带负电荷、粒径13-35nm的纳米金溶液作为指示剂，采用分光光度计或比色卡作为检测设备来检测聚六亚甲基胍含量。所述聚六亚甲基胍含量的检测方法，采用HEPES(羟乙基哌嗪乙磺酸)溶液作为缓冲液。所述聚六亚甲基胍含量的检测方法的具体步骤如下：1、准备标准溶液及试剂：氯金酸、柠檬酸钠、羟乙基哌嗪乙磺酸、蒸馏水、聚六亚甲基胍标准溶液。2、配制显色液和稀释液：1)合成带负电荷的纳米金溶液，其最大吸收波长520±5nm，粒径13-35nm；纳米金溶液的配制方法为：在93ml水中加入2ml，1％的氯金酸溶液加热沸腾后，再加入5ml，1％的柠檬酸钠溶液，继续加热20分钟，冷却至室温备用。2)配制pH值在6-8之间，1mol/L的HEPES(羟乙基哌嗪乙磺酸)溶液作为缓冲液；HEPES缓冲液的配制方法为：称取260.39克HEPES加入蒸馏水溶解，调节pH值6到8，定容至1L即可。3)配制显色液：将步骤1)和2)制得的纳米金溶液和HEPES缓冲液混合，HEPES溶液最终浓度小于100mmol/L。4)配制稀释液：将步骤2)制得的HEPES缓冲液，与蒸馏水混合，HEPES溶液最终浓度小于100mmol/L。3、采用分光光度计作为检测设备，通过绘制标准曲线检测待测样品中聚六亚甲基胍浓度。具体步骤如下：(1)配制不同浓度聚六甲基胍标准溶液，至少三个浓度；(2)取聚六甲基胍标准溶液，加入等体积的显色液，反应5分钟；(3)绘制标准曲线：用分光光度计测量上述步骤3-(2)中标准溶液的在波长600到700纳米之间的吸光值，每一浓度标准溶液的至少检测三次，取平均值，以聚六亚甲基胍标准溶液浓度为横坐标，以每一浓度标准溶液的吸收率为纵坐标，绘制标准曲线。(4)取待测样品，加入等体积的显色液，反应5分钟，用分光光度计测定待测样品在波长600到700纳米之间的吸光值，在步骤3-(3)绘制的标准曲线上查得相应的浓度值。步骤3还可以是：采用比色卡检测待测样品中的聚六亚甲基胍浓度。具体是：a、制作比色卡；b、取待测样品，加入等体积的显色液，呈色；c、与标准比色卡自上而下目视比色，与标准比色卡色调相近的颜色所对应的浓度即是待测样品中聚六亚甲基胍的含量。上述步骤a中比色卡的制作方法为：配制0.05ppm到0.5ppm的聚六甲基胍标准溶液，至少三个浓度，取一份标准溶液，加入等体积的样品与显色液，混匀，5分钟后用数码相机拍照，经图像处理后，彩色打印。本发明的原理是：在中性条件下，聚六甲基胍的胍基带正电荷与带负电荷的纳米金通过静电互作用，中和了纳米金上的部分电荷，使得纳米金发生聚集，并产生相应的肉眼可分辨的颜色变化，其600到700纳米处的吸光值与聚六甲基胍的含量呈正比，可以使用分光光度计实现对聚六亚甲基胍的定量检测，亦可以使用比色卡进行可视化检测。本发明的有益效果在于：1、本发明对聚六亚甲基胍样品的测定值与国家标准检测方法—聚六亚甲基双胍含量的测定方法(GB26367-2010)相关性良好，且在浓度0.05-0.5ppm范围内线性良好，检测限为0.05ppm，高于目前文献报道的灵敏度。2、本发明对聚六亚基单胍和聚六亚基双胍都能够测定，常见的阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、有机物及高浓度的盐离子不干扰测定，抗干扰性强。3、本发明还可以采用比色卡现场可视化检测待测样品中的聚六亚甲基胍浓度，而国标法无法检出。
附图说明
图1是本发明中绘制的标准曲线图；图2是本发明与国家标准检测方法相关性比较图；图3是本发明对不同分析物的检测实验图，图中的纵坐标表示670nm处的吸光值；其中，图3中横坐标的序号说明如下：1、5ppm的聚六亚基双胍(PHMB)标准品；2、5ppm的聚六亚基单胍(PHMG)标准品；3、5ppm十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)；4、0.1％牛血清白蛋白；5、0.05％十二烷基硫酸钠；6、0.05％Tween20；7、145mmol/Lxa0NaCl；图4是本发明采用比色卡现场可视化检测待测样品图，其中，图4第一行是采用本发明提供的比色卡法检测聚六亚基双胍浓度的图样，第二行是采用国标法提供的比色卡法检测聚六亚基双胍浓度的图样，图中数字为溶液中聚六亚基双胍的浓度，单位：ppm。
具体实施方式
以下结合附图和实施例具体说明本发明。实施例1：一种聚六亚甲基胍含量的检测方法，具体步骤如下：1、准备标准溶液及试剂：氯金酸、柠檬酸钠、羟乙基哌嗪乙磺酸、蒸馏水、聚六亚甲基胍标准溶液。2、配制显色液和稀释液：1)合成带负电荷的纳米金溶液：在93ml水中加入2ml、1％的氯金酸溶液加热沸腾后，再加入5ml、1％的柠檬酸钠溶液，继续加热20分钟，冷却至室温备用。合成的纳米金溶液，带负电荷，最大吸收波长在520±5纳米，粒径在13-35纳米之间；2)配制pH值在6-8之间，1mol/L的HEPES(羟乙基哌嗪乙磺酸)溶液作为缓冲液；HEPES缓冲液的配制方法为：称取260.39克HEPES加入蒸馏水溶解，调节pH值6到8，定容至1L即可。3)配制显色液：将步骤1)和2)制得的纳米金溶液和HEPES缓冲液按20：1体积比混合，HEPES溶液最终浓度为小于100mmol/L。4)配制稀释液：将步骤2)制得的HEPES缓冲液，与蒸馏水按1：20体积比混合，HEPES溶液最终浓度为小于100mmol/L。3、采用分光光度计作为检测设备，通过绘制标准曲线检测待测样品中聚六亚甲基胍浓度。具体步骤如下：(1)配制浓度为0.05-0.5ppm的系列聚六甲基胍标准溶液，使其浓度分别为0ppm，0.03125ppm，0.0625ppm，0.125ppm，0.25ppm，0.5ppm；(2)取聚六甲基胍标准溶液，加入等体积的显色液，反应5分钟；(3)绘制标准曲线：用分光光度计测量上述步骤3-(2)中标准溶液在波长670纳米的吸光值，每一浓度标准溶液至少检测三次，取平均值，以聚六亚甲基胍标准溶液浓度为横坐标，以每一浓度标准溶液的吸收率为纵坐标，绘制标准曲线，并做线性回归，见图1，标准曲线方程为：y＝0.2584x-0.0152(R²＝0.9999，n＝6)。(4)取待测样品，加入等体积的显色液，反应5分钟，用分光光度计测量波长在670纳米的吸光值。在步骤(3)绘制的标准曲线上查得相应的浓度值。(5)由线性回归方程可以得出，聚六甲基胍在0-0.5ppm范围线性良好，检测限为0.05ppm，高于目前文献报道的灵敏度。实施例2：本发明与国家标准检测方法相关性比较(1)配制浓度为0.05-0.5ppm的系列聚六甲基胍标准溶液，使其浓度分别为0ppm，0.03125ppm，0.0625ppm，0.125ppm，0.25ppm，0.5ppm；(2)取一份聚六甲基胍标准溶液，加入等体积的显色液，反应5分钟；(3)绘制标准曲线：用分光光度计测量上述步骤(2)中标准溶液波长在670纳米的吸光值，每一样品至少检测三次，取平均值，以聚六亚甲基胍标准溶液浓度为横坐标，以每一样品吸收率为纵坐标，绘制标准曲线，并做线性回归，标准曲线方程为：y＝0.2584x-0.0152(R²＝0.9999，n＝6)。(4)取20份不同样品稀释1000倍后，分别加入等体积的稀释后的样品与显色液，反应5分钟，用分光光度计测量波长在670纳米的吸光值。在步骤(3)绘制的标准曲线上查得相应的浓度值，并将结果乘以1000倍，即为样品的浓度。(5)按国家标准检测方法—聚六亚甲基双胍含量的测定方法(GB26367-2010)测定步骤(4)中20份不同样品的浓度值，并进行了相关性比较，结果表明，两者之间显著相关，相关方程为y＝1.076x-1.0883(R＝0.99)，见图2，符合国家标准和实际使用的要求。实施例3：对不同分析物的检测实验以5ppm的聚六亚基双胍(PHMB)标准品、5ppm的聚六亚基单胍(PHMG)标准品、5ppm十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、0.1％BSA、0.05％SDS、0.05％Tween20、145mmol/Lxa0NaCl作为分析物，样品与显色液比按体积比1:9加入，混合均匀后，在5分钟后样品测量在670nm波长的吸光值，如图3所示，结果表明该试剂盒不管是聚六亚基单胍，还是聚六亚基双胍都能够测定，且对常见的阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、有机物及高浓度的盐离子均有一定抗干扰能力，可以用于水体中聚六甲基胍的检测。实施例4：比色卡制作及目视比色法检测待测样品的比较实验配制0—5ppm的聚六甲基胍标准溶液，至少三个浓度，在96孔板中加入等体积样品与显色液，混匀，5分钟后用数码相机拍照，经图像处理后彩色打印制作比色卡。取六个不同浓度的样品，在96孔板中按1:9的比例加入样品与显色液，混合均匀，在5分钟后与标准比色卡自上而下目视比色，与标准比色卡色调相近的颜色所对应的浓度即是待测样品中聚六亚甲基胍的含量，其检测结果与设定值相当，见图4，表明本法可以裸眼分辨不同的浓度聚六甲基胍的色调，可以现场可视化检测待测样品，而国标法则很难分辨。